CRISPR用于人类iPS可以揭示基因在特定疾病中起到的作用，甚至可以校正患者细胞的基因缺陷。虽然CRISPR-Cas9和人类iPS在实验室中已经相当普及了，但二者相结合并没有想象中那么容易。The Scientist杂志与多位正在使用这两个工具的专家联系，推出了在人类干细胞中使用CRISPR的基础指南。这份指南对人iPS和人胚胎干细胞同样适用。
研究背景
肌联蛋白（TITIN）是一个巨大的肌小节蛋白,具有复杂的、分子折叠的功能，对肌肉细胞的舒张和收缩起重要作用。
导致Titin蛋白翻译截断的变异（TTNtv）是扩张型心肌病（DCM）中最常见的致病变异，约占20%。大部分的致病TTNtv
都集中在A带区域，而I带区域上发生的TTNtv则是可以耐受的。临床上还鉴定出大量的TTN错义突变，临床意义尚不明确。
建立一个有效的DCM模型将有利于变异分类、疾病机制研究和下游药物开发。
研究思路：建系&分化—疾病表型模拟—分子水平分析—小分子测试
1）建立病人/正常人的iPS细胞并分化成为心肌细胞；同时利用CRISPR-Cas9系统在野生型iPSC中引进特异变异
“p” patient- derived;
“c” CRISRP/Cas9-derived mutations
2）心肌细胞水平上未见肌张力变化相关表型，但是在心肌细胞3D培养形成的类器官上可以观察到生理水平的变化；进一步检测到肌节异常
3）RNA-seq用于分子水平分析，揭示TGFβ通路及VEGF通路下调
4）VEGF处理可以提高变异的心肌类器官的肌张力水平，为药物开发提供可能的靶点
研究背景
杜氏肌营养不良（DMD）
1）X染色体连锁的隐性遗传疾病；幼儿期（3-5岁）发病，肌无力，进行性加重，大约12岁失去独立行走能力，
易患扩张型心肌病，通常在20岁前死于肺炎、呼吸衰竭或者心力衰竭
2）致病原因：DMD基因功能缺失，主要变异类型是大片段缺失或者移码突变
贝氏肌营养不良（BMD）
1）晚发型肌无力，通常寿命可以达到40岁以上；症状较DMD轻微
2）致病原因：DMD基因功能部分缺失，主要变异类型是小片段in-frame缺失或者错义突变
DMD基因非常大，过去的基因治疗策略大部分是过表达截短的Dystrophin蛋白来部分回复蛋白功能
外显子跳跃策略在DMD治疗中的应用
针对移码突变型的DMD，把发生移码突变的一小段外显子整个去除，得到一个中部截短的蛋白，依然能行使大部分功能——DMD变成BMD。
研究思路
1）利用CRISPR-Cas9技术，在Exon两端设计两个sgRNA作用位点，切掉相关外显子区域
2）一步到位，从基因层面缓解DMD
| 技术团队 | 项目经验 | 结题项目 | 项目服务 |
|---|---|---|---|
| 10人+ | 1 年+ | 研发中 | 1对1 |
